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BIACORE抗体与抗原相互作用测试(捕获法,Protein A芯片)

2020-09-22 任剑刚 点击:[]

使用BIACORE ProteinA芯片检测抗体与抗原结合的动力学kakd和亲和力数据KD。本实验使用的抗体为抗人源B2微球蛋白的鼠单抗,分子量约为150KD;抗原为人源B2微球蛋白,分子量为11.8KD。本实验采用Protein A芯片以捕获法的方式固定抗体,抗原作为分析物检测其余抗体结合的动力学和亲和力数据。

一、实验使用机型、试剂盒耗材

1、本实验所用的机型:Biacore T200。

2、使用芯片:Protein A芯片。Protein A芯片可以捕获许多哺乳动物源的抗体,包括人源IgG1、IgG2、IgG4等。只结合抗体Fc区重链,不结合抗体Fab段,保证了抗体结合的定向性。购自GE Healthcare

3、缓冲液:10 × PBS-P +,购自GE Healthcare

4、去离子水(用0.22μm 膜过滤过)。

5、配体:抗人源B2微球蛋白的鼠单抗,母液浓度为1mg/ml

6、分析物:人源B2微球蛋白,母液浓度为85μM

7、其他耗材:无盖1.5ml EP管,96孔板,购自GE Healthcare

二、实验步骤

(一)开机

操作视频

(二)样品稀释 

1、运行缓冲液:本实验缓冲液选用的是HBS-EP+,将10ꓫHBS-EP+pH7.4)用去离子水稀释10倍,至少配制200mL。根据实验不同调整缓冲液的配制量。

2、配体浓度:用运行缓冲液将抗体溶液稀释至0.5μg/ml400μL(至少保证1:20的稀释比)。

3、分析物浓度:用运行缓冲液将抗原溶液分别稀释为:32nM16nM8 nM4 nM2 nM

(三)样品检测

本实验采用的配体偶联为捕获偶联的程序偶联法,偶联程序和样品测试程序在一起。在运行程序之前需要进行配体偶联量的调试工作。调试工作采用手动运行的模式进行。(操作视频

(四)、数据分析

本实验采用动力学分析。

操作视频

(五)关机

操作视频

 

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